了解RPMI1640培养基上的细胞培养中出现黑胶虫后的几种处理建议 [复制链接]
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雨中悄然 · 发表于 2019-10-2 16:09:48

　　　生物技术频道讯：“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。可见“黑胶虫”是一种异养生物。我们在RPMI1640培养基上的细胞培养中出现黑胶虫后污染怎么办？下面有几种处理建议，我们一起来了解下吧！
　　1、换好一点的血清，当然最好是进口胎牛血清（国产血清太脏），就是价格高的离谱，经济条件不允许，可以用进口新生牛血清代替。建议如果使用的是Hyclone或GIBCO的血清可不必灭活，这样可以有效减少“小黑点”的形成。一般的血清都不要去灭活处理，为什么呢？
　　因为经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活的血清，沉淀物的形成会显著增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。除非是在做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，才推荐做热灭活。所以在不是做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌RPMI1640培养基上的细胞培养时，血清尽量不经热灭活。
　　2、如果是贴壁细胞的话，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮的话，就不太好处理拉，可以向其中少加一点滋养细胞。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效！还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。如果细胞不是非常珍贵，可以用伯氨奎、磺胺、四环素、贝尼尔，也有建议庆大霉素500ug/ml洗涤。
　　3、换用进口的一次性塑料培养瓶。
　　4、停止复苏，停止养细胞，彻底消毒所有用于RPMI1640培养基上的细胞培养的一切用品，包括所用的培养瓶，培养基，吸管，胰酶，孵箱，超净台、空间等等你能想到的和RPMI1640培养基上的细胞培养相关的所有物品。一个星期后，再复苏污染之前冻存的细胞，注意你的白大衣衣袖污染即可。这样你可能觉得动作太大，但可以用一个星期的时间挽救两个月的时间，还有其他你为了找到污染源，去除污染所耗费的精力，和财力。
　　5、在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时加生理盐水再离心一次，接种密度稍大一些，一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生长也不会有大的影响。
　　所有东西最好重配；如果实在要抢救，重点突破，留几瓶污染不是很严重的细胞抢救，其余弃去
　　6、如果有其它可用的细胞，那么污染的细胞最好扔掉；如没有，可试着用抗生素，最可靠的是细菌培养加药敏，据药敏结果选择抗生素，当然不能影响到细胞的状态。
　　7、有材料称minocycline具有一定的作用，可以和换液结合起来使用。由于黑胶虫尚未明确鉴定出是什么生物，所以上述的处理方法不一定正确，可以供考虑采用。
　　8、有人为寻找到杀灭“黑胶虫”的方法，做了一个试验，他取有“黑胶虫”污染的六孔板，每孔内有2ml培养液，向有污染的孔内分别加入0.5ml、1ml、2ml、3ml的新洁尔灭原液，边加边在倒置显微镜下观察。最后他得出结论：新洁尔灭与水或培养基的比例为1：4时即可杀死“黑胶虫”。但是新洁尔灭对细胞的负面影响太大，比较珍贵的RPMI1640培养基上的细胞培养最好不采用此方法。
　　
　　在RPMI1640培养基上的细胞培养实验中，人们遇到的撼娌⒉欢际且谎模邢笙妇摹⒂邢笾г宓摹⒂邢笤娴摹⒂邢笳婢模褂邢笙赴槠摹Ｔ诠诟鍪笛槭业钠鞑奶跫尾畈黄耄沂笛槿嗽钡牟僮髦柿恳膊痪∠嗤恢窒窒笠部赡苡行┬聿钜欤庇妹枋龀隼吹南窒蟮牟钜炜赡鼙浯笠部赡鼙湫　Ｋ院芏嗳丝吹较赴幌妇廴玖耍缓么恚疵枋龀隼吹南窒蠛土鞔暮诮撼胬嗨疲突岚雅嘌О艿脑蚬榻岬轿薹ù淼狞胶虫污染，甚至可能说它发现的是真正的黑胶虫。这样的事情多了，黑胶虫就会人为的变种，象什么的都有。黑胶虫是否存在，还有待于科学的发展。但有一点可以肯定的，大部分人发现的“撼妗辈⒉皇钦嬲歉鑫粗狞胶虫，而是不很常见的细菌、真菌、原虫等微生物污染。

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